新闻中心

抗体酵母展示系统

来源:戴安生物 发布时间:2022-08-04 浏览量:109次

抗体展示技术使成功分离具有治疗潜力的抗原特异性抗体成为可能。其中,噬菌体展示系统是最成熟的系统,目前已有十几种通过噬菌体展示技术获得的治疗性抗体获批上市。近年来,其他几项技术也达到了一定的成熟程度,其中比较引人注目的是酵母展示系统。与其他展示系统相比,酵母展示系统作为真核展示系统的主要优势是其高效的翻译后修饰机制和更好的适应于合成具有多个二硫键的复杂哺乳动物蛋白质。酵母展示系统促成了PD-1阻断抗体分子Sintilimab的产生,该分子已在中国获得上市批准,用于治疗难治性经典霍奇金淋巴瘤等适应症。 酵母展示系统技术是由Boder和Wittrup于1997年首创的。外源蛋白通过与酵母细胞壁蛋白的融合,在酵母表面展示。酵母含有200nM厚的细胞壁,由β-多糖、甘露糖蛋白和壳多糖组成。标签蛋白纯化试剂盒,修饰性抗体定制,噬菌体展示酵母细胞壁的内表面,通过形成紧密的壳多糖连接的β-1,3-葡聚糖微纤维的骨架层来阻止大分子的渗透。外表面由更易溶的分支β-1,6-葡聚糖和甘露糖蛋白组成。在大多数酵母展示系统中,展示在外细胞壁上的大多数异源蛋白通过 GPI(糖基磷脂酰肌醇)在其 C 端共价连接到 β-1,6-葡聚糖上。GPI锚定蛋白通过内质网-高尔基体分泌途径转运到酵母细胞表面,并与细胞壁甘露糖蛋白层形成β-1,6-葡聚糖桥。 虽然不同的酵母菌株被用来展示各种蛋白质和多肽,但基于酿酒酵母Aga1-Aga2的酵母展示系统是最受欢迎的系统,它具有109库容量。这种方法的原理是基于融合到Aga2蛋白上的外源蛋白的表达。Aga2蛋白本身通过两个二硫键与Aga1蛋白锚定在细胞膜上,从而在酵母表面形成一个共价复合体。外源蛋白和多肽可以与Aga2的N-端或C-端融合。利用该系统,仅在一个酵母细胞的表面就可以展示超过3×104个异源蛋白质分子。EBY100作为一株酿酒酵母工程菌株,可应用于Aga1-Aga2酵母展示系统

标签蛋白纯化试剂盒,修饰性抗体定制,噬菌体展示

杂交瘤技术 杂交瘤技术又称为单克隆抗体技术,是在体细胞融合的技术基础上发展而来的。这项技术将免疫动物的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,即可形成在体外长期存活并分泌免疫蛋白的杂交瘤细胞,通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系,即杂交瘤细胞系,利用杂交瘤细胞可以大量的生产单克隆抗体。

 

标签蛋白纯化试剂盒,修饰性抗体定制,噬菌体展示

细胞融合技术是杂交瘤技术的基础,通过聚乙二醇(PEG)(最常用)、仙台病毒、电转等方法对细胞进行人工诱导,可使两个细胞通过膜融合形成单个细胞。融合细胞的筛选 HAT培养基筛选技术是杂交瘤技术中另一个关键的技术,在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后,会产生多种融合结果(未融合的骨髓瘤细胞、未融合的B淋巴细胞、B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、正确融合的杂交瘤细胞),为了得到所需的杂交瘤细胞,必须利用 HAT 培养基对融合后的细胞进行筛选。HAT培养基的筛选原理为:DNA合成途径有生物合成途径与应急合成途径两种,HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷酸(T)等物质,标签蛋白纯化试剂盒,修饰性抗体定制,噬菌体展示氨基喋呤可以对 DNA的生物合成途径进行阻断,骨髓瘤细胞会因为生物合成途径被阻断且自身缺乏应急合成途径导致不能增殖进而快速的死亡;而B淋巴细胞因缺乏体外增殖的能力,一般在10天左右死亡;杂交瘤细胞具有体外增殖能力且由于次黄嘌呤与胸腺嘧啶核苷酸的存在,可以通过应急途径合成DNA并在 HAT培养基中正常生长,不会死亡。因此将融合后的细胞放于 HAT 培养基中培养,其他的融合结果会全部死亡,最终筛选出杂交瘤细胞。

标签蛋白纯化试剂盒,修饰性抗体定制,噬菌体展示

武汉戴安生物技术有限公司 版权所有 | 鄂ICP备16017837号-2 友情链接:锐竞采购平台喀斯玛商城
服务QQ 产品QQ