武汉戴安生物技术有限公司

宿主细胞蛋白残留检测服务

宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒开发及技术服务

1.        什么是HCP

宿主细胞蛋白(host cellprotein, HCP) 是指生物制品中来自生产细胞系的宿主细胞的蛋白成分, HCP具有潜在的安全风险, 作为生物制品中的非目标成分,HCP可能引发机体未知的免疫应答而影响生物制品的功效,甚至引起超敏反应或其他不良反应。因此,建立合适的HCP检测方法,有助于生物制品的质量控制,提高生物制品的使用安全性。

所有生物制剂的工艺开发的都必须经过HCP检测,并证明已在纯化过程中将它们降低到安全水平,一般要求每mg药物HCP应当控制在ng范围内。《中华人民共和国药典》明确规定,CHO细胞残余蛋白占总蛋白含量要小于0.05%以下才符合规定;美国FDA规定,用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCP,其含量应该低于检测限(通常小于100ppm)。

ELISA是目前应用最广泛的HCP检测方法,该方法操作相对简单、精度良好,方便设定控制范围和建立技术规范,中华人民共和国药典2010年版三部中的HCP检测均要求采用酶联免疫法测定。


2.        为什么要定制HCP检测试剂盒?

目前生物制品行业多以商业化的通用型HCP ELISA试剂盒来检测产品中的宿主蛋白残留。但宿主细胞的分泌型蛋白和部分死亡细胞释放的结构蛋白成分复杂,不同的工艺,加上相关基因产物需要经过独特的翻译后修饰,这些都导致不同生物制品中HCP的成分和比例有较大差异。使用通用型的HCP ELISA试剂盒,通常会缺乏特异性的评估,会带来漏检和检测结果批间差过大的风险,从而对生物制品质量安全带来风险。

建立特异性HCP检测方法费时且研发成本较高,但是研发成功后,可以获得长期安全有效的保障;如果从大量使用角度考虑,成本也远低于商业化的通用型ELISA试剂盒。


3.        HCP检测试剂盒定制服务流程

1)  用空载体转化宿主细胞,培养空载细胞系。

2) 按正常生产流程纯化空载细胞系培养物,可以省去最后几个步骤,以便尽可能保留HCP成分。

3)  HCP免疫合适的动物宿主,例如兔,山羊,绵羊或鸡,通过级联免疫(Cascade Immunization),大大提高抗体对微量蛋白质检测的敏感性。

4)  提取宿主产生的抗体,通过2D凝胶电泳/ Western印迹检查抗原的覆盖率。

5)  筛选最佳抗体及抗体组合。

6)  配制夹心ELISA试剂盒。  

4.      我们的优势

1)       丰富的抗原抗体制备经验:技术团队拥有十余年抗体制备经验,技术全面精湛。

2)       独特的佐剂和免疫方式:采用自制特殊佐剂, 特殊免疫流程, 专用于高效价抗体制备。

3)       完善的抗体鉴定机制:多途径多方法鉴定抗体质量,获得最优检测结果。

4)       积极完善的服务方式:保证定制获得的试剂盒可以测到ng/ml以下的灵敏度。




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级联免疫流程


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