武汉戴安生物技术有限公司

服务介绍
单克隆抗体是杂交瘤细胞产生的针对单一抗原决定簇的免疫球蛋白,其最大的优势是特异性强、灵敏度高及强大的批次稳定性。近年来单克隆抗体对蛋白质研究、药物筛选、疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等,均展示出重要的研究价值。


武汉戴安生物凭借多年的抗体研发和生产经验,为您提供专业的鼠单克隆抗体制备服务,包括抗原制备,细胞融合筛选,亚克隆,单抗制备等。我们根据可抗原蛋白性质,选择最佳的制备方案免疫动物;并通过HAT选择培养基筛选融合细胞,并对融台细胞进行ELISA阳性筛选及亚克隆;筛选出的阳性单克隆,取腹水,用Protein A/G抗体纯化柱纯化抗体,纯化后的抗体ELISA效价>1:160,000,纯度>90%。交付的单抗可以用于免疫组化、ELISA、体外诊断检测等下游实验,免费提供1-3株单抗细胞株。
多宿主选择: 可提供实验用BALB/c小鼠,实验用大鼠,豚鼠等多种实验宿主。
多抗原选择可接受重组表达蛋白质抗原,多肽抗原,小分子抗原,病毒/细胞抗原等抗原类型。(注:病毒,细菌,支原体等多种微生物由公司负责采用适宜抗原处理方式,可用于制备中和抗体;多种小分子由武汉戴安生物负责活化方案和载体蛋白偶联)

鼠单克隆抗体制备流程


项目

说明

动物

5BALB/c小鼠    4SD大鼠可选

弗氏佐剂

加弗氏完全佐剂进行初免,加弗氏不完全佐剂进行加强免疫

免疫原

每只小鼠每次注射50-100ug蛋白或多肽偶联物

免疫

免疫原与佐剂等量混合,采用皮下多点联合腹腔注射抗原

周期

1

采血0.02ml(获得0.02ml免疫前血清)
第一次免疫(抗原加弗氏完全佐剂)

15

第二次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂)

30

第三次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂)

45

第四次免疫(抗原溶于PBS或盐水)

52

采集抗血清发送客户检测内源样本检测(20uL/)

58

公司检测ELISA效价,根据ELISA检测结果,决定是正常牺牲小鼠还是调整免疫周期

65

根据公司ELISA效价结果和客户内源性结果选择合适小鼠冲击免疫,0.25mg免疫原(盐水), 腹腔注射

70

细胞融合

细胞融合

进行ELISA检测,确定抗血清效价大于1:10K的小鼠用于细胞融合

ELISA筛选

融合细胞铺96孔板培养,ELISA筛选阳性克隆

亚克隆

阳性克隆用有限稀释法进行多次亚克隆。筛选稳定的单克隆杂交瘤细胞株进行扩增培养

细胞上清内源验证

取杂交瘤细胞株的培养上清鉴定亚型并寄送给客户进行内源性实验验证,阳性细胞株冻存并计划制备腹水

腹水制备

弗式不完全佐剂致敏小鼠,3-10天以后腹腔注射细胞,10天左右收集腹水

抗体纯化

利用protein A 或者Protein   G 亲和纯化

内源样本检测

获得的纯化后抗体寄给送客户,保证客户能用于内源实验

交付

每株克隆提供给客户5mg左右抗体,1瓶活细胞或者3管冻存的细胞

周期总计

22~26


特色
●免费分析抗原序列,利用专业的抗原设计软件设计抗原,结合文献,综合选择免疫原序列;
●可制备高质量的抗原(重组蛋白纯度>90%,浓度1mg/ml);
●采用自我研发新型佐剂免疫动物,可最大程度提高效价;
●可提供5-10株阳性细胞株上清供客户筛选;
●满足客户各种属KO验证,确保抗体特异性。

TIPS:
除小鼠单克隆抗体外戴安生物还推出了大鼠单克隆抗体,解决小鼠蛋白的抗体因抗原同源性而造成的免疫耐受的问题;具备pM级的亲和性和高特异性,可同时识别人类蛋白及其小鼠同源蛋白; 大鼠单抗细胞上清的产量可达70-120ug/ml,提供稳定分泌抗体功能的大鼠杂交瘤细胞株;
另外戴安生物小分子单克隆抗体制备经验丰富,成功率高:半抗原设计经验丰富,免疫半抗原设计的基本原则是免疫半抗原与载体连接后在结合抗原中能最大程度保持和突出待测物的特征结构,特别是立体结构,且与载体蛋白偶联效率高,时间短;偶联位点可选,偶联比根据客户要求可调整;小分子半抗原活化后分别偶联蛋白制备完全抗原(免疫抗原)与检测抗原,蛋白电泳测试。

服务承诺
我们承诺

1客户进行Western Blot内源性或者IP过表达检测小样后能够检测到目的条带(说明抗体验证合格);

(2) Western Blot内源性或者IP过表达检测阴性无法满足实验需要,等于此抗体订单验证失败,则甲方无需再付此项目剩余尾款;

(3) 间接ELISA检测抗血清效价,针对免疫原效价不低于1:160,000;

(4) 客户有权随时了解服务项目进展情况,并对成果拥有全部所有权。


交付结果

(1) 纯化的免疫原小样一份(100ug左右);

(2) 腹水纯化抗体5-10mg ;

(3) 质粒小样一份;

(4) 阳性细胞株3株(如需更多,可与公司沟通)

(5) 20μL小鼠免疫前阴性血清(有需要请备注);

(6) 项目服务报告 。

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