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单克隆抗体药物的制备方法?

来源:戴安生物 发布时间:2022-10-14 浏览量:789次

杂交瘤技术是在上世纪七十年代发展起来的一种抗体制备技术。杂交瘤技术发展到现在,已经相当成熟,主要包括以下几个环节:动物免疫(通常免疫小鼠) --> 取动物的脾细胞或淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合 --> 筛选识别抗原的单克隆杂交瘤 --> 利用筛选到的杂交瘤生产单克隆抗体。 杂交瘤技术是一种很有效地单抗制备技术,已成功地应用于制备各种检测用抗体和治疗用抗体,国内外很多高校及研究机构都建立了基于杂交瘤技术的单抗制备平台。但是,近四十年的杂交瘤技术的应用经验也表明,利用杂交瘤技术进行单抗的制备似乎更适合手工作坊式的生产方式,而很难真正实现流水线式的工业化生产。单抗定制,抗体测序及表达,斑马鱼抗体定制

这主要是由于杂交瘤技术本身的环节多,细节复杂,对人的技能依赖程度高。这些原因不仅导致该技术难于实现工业化,也导致基于该技术的单抗制备的成功率低。事实上,低成功率(70%或更低)是目前基于杂交瘤开展单抗定制服务领域的一个普遍现象。正是由于杂交瘤技术发展比较成熟,而且技术门槛比较低,目前国内几乎所有的单抗定制服务都是基于杂交瘤技术平台,不同的单抗定制服务商只是在某些具体环节上稍有差异,其整体服务水平(包括定制周期,成功率等主要技术参数)并没有显著的差异。单抗定制,抗体测序及表达,斑马鱼抗体定制

噬菌体呈现抗体库技术平台是在上世纪90年代初步发展和成熟起来的一个单抗制备技术平台,其基本步骤包括:构建大容量高质量抗体库-->将抗体库呈现在噬菌体表面-->利用目的抗原对抗体库进行高通量筛选-->阳性单克隆鉴定-->利用哺乳动物细胞表达系统制备重组抗体。 与杂交瘤技术不同,利用噬菌体抗体库技术来制备抗体的技术门槛较高,涉及多种高新生物技术的综合应用,包括:大容量抗体库的构建技术,噬菌体呈现及高通量筛选技术,基因工程抗体技术,哺乳动物细胞高表达技术等。

单抗定制

抗体药物(antibody-based durg)是一类重要的靶向药物,应用于癌症,慢性炎症,自身免疫疾病的治疗。然而,大规模抗体生产会面临很多挑战,需要付出高昂的生产成本: 抗体纯化工艺流程是复杂的,而且特定的抗体常常需要开发适应于自身的特定纯化工艺。 哺乳动物细胞表达抗体蛋白时,异常翻译后修饰发生的频率很高,这使得大量的,高成本的质量控制成为必需。 表达抗体的哺乳动物细胞系非常容易发生突变,需要高昂的费用去维持细胞系的稳定性。 抗体本身非常容易被血清中的酶快速清除降解。在某些情况下,快速的抗体清除会导致频繁的药物服用,从而造成治疗成本的上升,还可能导致副作用的产生,甚至激活免疫系统。单抗定制,抗体测序及表达,斑马鱼抗体定制

相比之下,将mRNA技术应用于抗体药物表达,拥有诸多优势: IVT-mRNA已经被证实可以在体内表达高水平的蛋白。 面对不同的抗体,IVT-mRNA生产工艺是通用的,不需要不断重新开发新的工艺。 IVT-mRNA生产不需要细胞系,属于化学合成路线。 IVT-mRNA使得抗体结构的优化大大简化,只需要改变mRNA序列即可。 使用IVT-mRNA技术时,人体细胞成为抗体生产的场所,更有利于抗体翻译后修饰的控制,而且可以直接靶向细胞内靶点。 尽管mRNA非常不稳定,但是合成的时候引入修饰碱基可以极大地改善mRAN稳定性,并且减少免疫原性。 IVT-mRNA发挥功能不需要进入细胞核,宿主细胞发生整合突变的概率是非常小的。单抗定制,抗体测序及表达,斑马鱼抗体定制

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