“OD值”这个概念想必做实验的各位小伙伴们都不陌生，从判断提取核酸的质量及浓度，到BCA蛋白定量进行蛋白定量，又或者是ELISA实验检测目的蛋白含量，这些常用的基础实验都需要检测样品的“OD值”，但是，“OD值”到底是个什么东西，我们在测量“OD值”的时候又有哪些需要注意的问题，今天就让小编给小伙伴们好好说道说道。兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒

什么是“OD”值？ OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。 了解了“OD值”是什么之后，接下来我们再看看在不同的实验中测量“OD值”有哪些需要注意的。 最需要注意的就是测量时的光波长。兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒

上文在介绍“OD值”概念时提到，吸光度利用的是物质特有的吸收光谱，实际操作中我们需要注意的最关键的也是这一点，不同物质的吸收光谱不同，最大吸收峰的波长也不同，为了达到最好的测量效果，一般来讲，我们需要在待测物质的最大吸收波长处来检测其“OD值”。例如，核酸在260nm波长处光吸收最大，而蛋白和酚类物质则在280nm波长处光吸收最大；BCA法检测蛋白含量时，显色反应后，溶液由浅绿色变为紫色，此时在560nm处有最大光吸收值；TMB法显色的ELISA实验，在加入终止液后溶液由蓝色变为黄色，在450nm处有最大光吸收。兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒

除了吸收波长，一些实验还需要设置校正波长，校正波长往往远离最大吸收波长，作为本底吸收，排除由于气泡、灰尘等其他系统误差造成的“OD值”偏差。根据测得的“OD值”，进行双波长校正，可以有效的减少系统误差造成的影响。 对于测量得到的待测样本“OD值”还需要进行换算才可以得到最终的浓度，有很多小伙伴往往在这一步出现错误，功亏一篑。

需要注意的地方也比较简单，就是根据对应试剂盒的说明书，采用推荐的曲线拟合方式进行拟合，拟合后需要看一下拟合曲线的R2值，约接近1证明曲线拟合度越高，结果越可信。如果R2值较低，则需要检查是否出现标准品稀释问题或实验操作出现失误。拿爱必信的试剂盒来举例，BCA 蛋白定量试剂盒（abs9232），此款试剂盒推荐的标曲拟合方式就是直线拟合，而ELISA试剂盒系列产品，则推荐用四参数拟合方式进行标曲拟合。选择错误的拟合方式，会影响曲线拟合度，R2值较低，回归计算的待测样品浓度也不准确。温馨提示：BCA蛋白定量实验以及ELISA实验的显色过程都是受反应时间及温度等条件影响的，需要根据实验情况及时终止实验进行读数，做实验时尽量不要走开哦~兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒

一. 多肽的保存 多肽保存：如果以冻干粉形式的多肽，经密封包装可在常温条件下稳定运输，但是溶解状态的多肽不宜长期保存。 保存：所以需要长期保存的多肽，应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内，置于-20°C保存，-80°C效果更好，可以最大限度地避免多肽降解，避免了被细菌降解和氧化，也可以避免二级结构的形成。大多数肽用这种储存方式可以使多肽保存半年以上，稳定性差一些的多肽一般也可以保存3个月以上。 打开包装： 在打开包装和称重前，请先将多肽在干燥器中平衡至室温。因多肽往往具有吸湿性，未经平衡到室温的多肽在打开盖子后易凝结，从而降低了多肽产品的稳定性。 称重： 迅速称取您所需的多肽，并将剩余多肽继续储存在-20°C或更低温度。当无法冷冻干燥时，最好的方法是分装成较小的样量存放，分批次取用，并尽快使用。 其他：含Met,Cys,Trp,Gln或Asn的多肽容易降解，所以相对于其他不含此类氨基酸的多肽，其保存期较短,尤其是N末端为Gln，建议尽快使用。兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒

二.多肽的溶解 溶解多肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列，所以，设计多肽时要加注意，肽序列中建议应包含20%的带电残基以增加其溶解度。 在使用之前，客户可以遵循以下三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多肽。 首先，所选溶剂一定能充分溶解多肽；其次，所选溶剂能与实验条件兼容；最后，所选溶剂不能与肽反应，也不能使肽降解。 只要肽的量允许，可以先用少部分肽溶解，然后再将全部样品溶解。如果需要从溶剂中回收肽，可以选择 一种初始溶剂使其在冻干后容易去除。 以下建议或许对您溶解肽有所帮助： 1. 少于5个氨基酸的肽一般溶于水溶液，强疏水的氨基酸（W，I，L，F，M，V，Y）除外。 2. 如果带电氨基酸平均分布于全部序列中，那么含有>25%带电氨基酸（E，D，K，R，H）的亲水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的纯化系统一般为0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此，如果肽溶解在没有缓冲能力或者缓冲能力很弱的缓冲液中，结果可能导致肽溶液呈酸性。在使用别的方法溶解肽时务必使溶剂的pH值近乎中性。酸性肽（E+D残基数多于K+R+H残基 数）和碱性肽（K+R+H残基数多于E+D残基数）在中性pH值条件下比在酸性pH值下更易于溶解。 3. 对于疏水氨基酸含量为50%～75%的肽，即使序列中含有>25%带电氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。最好先把肽溶于最少量的强有机溶剂如DMF、ACN、异丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素，或者DMSO（序列中没有C，W，M时），及其它类似的有机溶剂中。最好将溶解肽的有机溶 剂缓慢地逐滴加入水溶液中，如果溶液变浑浊，可能是达到了溶解极限，继续溶解就没什么用了。 需要注意的是，最开始选择的溶剂应该与实验系统兼容。 4. 疏水氨基酸含量>75%的强疏水肽一般也不溶于水溶液。此类肽也应该先用强有机溶剂（如TFA，甲酸）溶解，如果将其加入到水溶液中也可能产生沉淀。最后的肽溶液可能需要高浓度的有机溶剂使之变性，而有机溶剂一般不用于活细胞的生物功能研究。 5. S，T，E，D，K，R，H，N，Q，Y含量高（>75%）的多肽序列容易形成多余的分子间氢键网络， 在浓的水溶液中容易形成凝胶。此类肽可以用步骤3所述方法溶解。为了减少溶解中可能出现的问题，建议客户从设计上和序列上多加考虑，以改善肽的溶解度。兔单抗定制,标签蛋白纯化试剂盒,免疫沉淀试剂盒